Единственный достоверный факт, сообщаемый Евангелиями, — то, что Левий Матфей был мы́тарем, то есть сборщиком пошлин. В тексте Евангелия от Матфея апостол назван «Матфей мытарь», что, возможно, указывает на смирение автора, так как мытари глубоко презирались иудеями. Евангелие от Марка (2:14) и Евангелие от Луки сообщают о призвании Левия Матфея:
После сего [Иисус] вышел и увидел мытаря, именем Левия, сидящего у сбора пошлин, и говорит ему: следуй за Мною. И он, оставив всё, встал и последовал за Ним. И сделал для Него Левий в доме своём большое угощение; и там было множество мытарей и других, которые возлежали с ними
Ф. А. Бруни. Эскиз для Исаакиевского собора — Евангелист Матфей (1840-е гг)
О дальнейшей жизни Матфея почти ничего не известно. По одним источникам, он проповедовал в Эфиопии, где был замучен около 60 года; по другим, он был казнён за проповедь христианства в малоазийском городе Иераполис. Однако в соответствии с так называемым Каталонским атласом, датированным 1375 годом, на северном берегу озера Иссык-Куль в Киргизии изображено здание с крестом, а рядом имеется надпись: «Место, называемое Иссык-Куль. В этом месте монастырь братьев армянских, где пребывает тело святого Матфея, Апостола и Евангелиста».
Согласно другой, самой распространённой на сегодняшний день версии, мощи апостола Матфея в X веке были привезены в итальянский город Салерно, где и находятся по сегодняшний день в местном кафедральном соборе, привлекая паломников-христиан со всего мира.
Святой апостол и евангелист Матфей часто изображался на иконах и произведениях искусства. Три картины из жизни апостола кисти Караваджо принадлежат к выдающимся шедеврам живописи.