Метод Лоури
Ме́тод Ло́ури — один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе. Предложен американским биохимиком Оливером Х. Лоури в 1951 году[1]. Является самой цитируемой научной статьёй в мире (по данным на апрель 2025 года статья была процитирована более 350 тыс. раз)[2]. Метод Лоури применяется в биохимических исследования, а также при анализе лекарственных препаратов (вакцин, иммунобиологических препаратов).
Общие сведения
| Метод Лоури | |
|---|---|
| Lowry protein assay | |
| Область использования | Аналитическая химия, биохимия, медицинская химия, фармацевтическая химия |
| Дата появления | 1951 год |
| Автор понятия | Оливер Х. Лоури |
Принцип
.jpg)
В щелочной среде ионы Cu2+ образуют комплекс с пептидными связями, переходя в Cu+. Одновалентные ионы меди реагируют с реактивом Фолина — Чокальтеу (фосфомолибденовая кислота с фенолом), образуя нестабильный продукт, переходящий в молибденовую синь, с максимумом поглощения при 750 нм. Реактив Фолина — Чокальтеу имеет синий цвет. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации белка.
Увеличение поглощения при 750 нм пропорционально концентрации белка. Метод очень чувствителен к наличию в растворе посторонних восстановителей, например ЭДТА, Трис, соли калия, что затрудняет его использование при определении белка в неочищенных препаратах[3]. Чувствительность к белку — 10—1000 мкг/мл[4].
Для анализа растворов методом Лоури применяются кюветы, помещаемые в спектрофотометр.
Модификации
Для определения белка в биологических лекарственных препаратах существует четыре модификации метода Лоури:
- без предварительного осаждения (определение содержания белка от 0,04 до 0,16 мг/мл);
- с предварительным осаждением белка (определение содержания белка от 0,1 до 0,13 мг/мл);
- для сорбированных препаратов (определение содержания белка от 0,02 до 0,16 мг/мл);
- для сорбированных препаратов (определение содержания белка от 0,01 до 0,02 мг/мл)[5].
Примечания
- ↑ Lowry, OliverH. et al. Protein measurement with the Folin phenol reagent // Journal of Biological Chemistry. — 1951. — № 193. — С. 265—275.
- ↑ Richard Van Noorden. These are the most-cited research papers of all time (англ.) // Nature. — 2025-04-15. — Т. 640, вып. 8059. — С. 591–591. — ISSN 1476-4687 0028-0836, 1476-4687. — doi:10.1038/d41586-025-01124-w.
- ↑ Геворгиз Р. Г., Железнова С. Н., Нехорошев М. В. Количественное определение массовой доли суммарных белков в воздушно-сухой биомассе микроводорослей методом Лоури: учебно-методическое пособие. — Севастополь: Институт морских биологических исследований имени А. О. Ковалевского, 2017. — 43 с.
- ↑ Ганеева Л. А., Зайнуллин Л. И., Абрамова З. И., Тенишева Н. Х. Биохимия. Практикум : Учебное пособие по курсу «Медицинская биохимия». — Казань: ИСБ, 2015. — 176 с.
- ↑ Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в биологических лекарственных препаратах. Институт фармакопеи и стандартизации в сфере обращения лекарственных средств (2018). Дата обращения: 12 июля 2025.