Метод Бредфорда
Ме́тод Бре́дфорда — один из колориметрических методов количественного определения белков в растворе. Предложен американским биохимиком Мерионом Бредфордом в 1976 году[1]. Статья М. Бредфорда в журнале Analytical Biochemistry, посвящённая методу количественного определения белка в растворе, является одной из самых цитируемых научных статей в мире[2].
Общие сведения
| Метод Бредфорда | |
|---|---|
| Дата появления | 1976 год |
| Автор понятия | Мерион Бредфорд |
Принцип
Метод основан на реакции красителя кумасси (Coomassie Brilliant Blue G-250)[3] с аргинином и гидрофобными аминокислотными остатками. Связанная форма имеет голубую окраску с максимумом поглощения при 595 нм. Таким образом увеличение светопоглощения раствора при длине волны, равной 595 нм, пропорционально количеству белка в растворе[4].
Метод даёт хорошее значение концентрации белка в пределах от 2 мкг/мл до 120 мкг/мл (в этих границах соблюдается линейная зависимость увеличения абсорбции от концентрации, в целом чувствительность метода зависит от соотношения концентраций определяемого белка и красителя: чем больше красителя, тем чувствительней метод). Анализ по Бредфорду имеет ряд ограничений, а именно: влияние сторонних веществ, которые могут искажать результат, связывание красителя кумасси с определёнными белками.
Примечания
- ↑ Marion M. Bradford. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Analytical Biochemistry. — 1976-05. — Т. 72, вып. 1-2. — С. 248–254. — ISSN 0003-2697. — doi:10.1016/0003-2697(76)90527-3.
- ↑ Lally, Robin. Marion Bradford revolutionized research, UGA Today (27 сентября 2019). Дата обращения: 12 июля 2025.
- ↑ Определение белка: метод окрашивания белков при помощи Coomassie G250. Дата обращения: 12 июля 2025.
- ↑ Кнорре Д. Г., Мызина С. Д. Биологическая химия. — 3. — Москва: Высшая школа, 2000. — 479 с. — 7000 экз. — ISBN 5060037207.