Впервые Донской казачий полк под № 2 был сформирован 26 мая 1835 года на основании нового положения о Донском казачьем войске. Периодически этот полк созывался в строй и распускался на льготу, также менялся его текущий номер (в зависимости от свободного номера полка при созыве). Кроме номера в названии полка также положено было означать и имя его текущего командира.
Полк этот также, как и его предшественник полк Сысоева, принимал участие в Кавказских походах.
В 1849 году полк совершил поход в Венгрию. В Крымскую войну сражался с турками на Дунае, а затем находился в Крыму и был в делах с англо-французами.
В 1872 году с Дона на внешнюю службу был вызван очередной Донской казачий № 33 полк и 27 июля 1875 года он был назван Донской казачий № 2-го полк. С этих пор оставался первоочередным и более на льготу не распускался.
С 24 мая 1894 года полк именовался как 2-й Донской казачий полк.
26 августа 1904 года вечным шефом полка был назван генерал Сысоев и полку велено именоваться 2-м Донским казачьим генерала Сысоева полком.
23 января 1914 года полку пожаловано шефство Наследника ЦесаревичаАлексея Николаевича и велено именоваться впредь 2-м Донским казачьим Его Императорского Высочества Наследника Цесаревича полком.
В 1914—1917 годах полк принимал участие в Первой мировой войне. Отличился в ходе боевых действий в Прибалтике в апреле - мае 1915 г.[1]
Полковое Георгиевское знамя с надписями «За подвиг при Шёнграбене 4-го ноября 1805 года в сражении 5-ти тысячного корпуса с неприятелем, состоявшим из 30-ти тысяч» и «1570—1907», пожалованное 9 августа 1908 года (первое отличие унаследовано от Донского казачьего Сысоева полка, которому знамя с этой надписью было пожаловано 13 июля 1806 года) и Александровскими юбилейными лентами.
Одиночные белевые петлицы на воротнике и обшлагах нижних чинов, пожалованные 6 декабря 1908 года.