Реактив Эллмана
Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) (ДТНБ)[1] — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце[2]. Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году[3].
Общие сведения
| Реактив Эллмана | |
|---|---|
| Общие | |
| Систематическое наименование |
5-(3-карбокси-4-нитрофенил)дисульфанил-2-нитробензойная кислота |
| Сокращения | ДТНБ; DTNB |
| Традиционные названия | Дитионитробензойная кислота; 5,5'-Дитиобис(2-нитробензойная кислота) |
| Хим. формула | C14H8N2O8S2 |
| Физические свойства | |
| Молярная масса | 396,34 г/моль |
| Термические свойства | |
| Температура | |
| • кипения | 240 - 245 °C |
| Классификация | |
| Рег. номер CAS | 69-78-3 |
| 3D model (JSmol) | Интерактивная схема |
| PubChem | 6254 |
| UNII | 9BZQ3U62JX |
| CompTox Dashboard EPA | DTXSID5058779 |
| Рег. номер EINECS | 200-714-4 |
| SMILES | |
| InChI | |
| ChEBI | 86228 |
| ChemSpider | 6018 |
| ECHA InfoCard | 100.000.650 |
| Безопасность | |
| Фразы риска (R) | R36, R37, R38 |
| Фразы безопасности (S) | S26, S36 |
| Краткие характер. опасности (H) |
H315, H319, H335 |
| Меры предостор. (P) |
P261, P305, P338, P351 |
Приготовление
В оригинальной статье Эллмана[2] описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия, а затем соединил два мономера, окислив их йодом. В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.
Тест Эллмана
При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.
Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определяться при помощи спектрофотометра. Для разбавленных буферных растворов используется молярный коэффициент экстинкции 14,150 M−1 см−1[4][5], а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M−1 см−1[5]. К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M−1 см−1, и эта ошибка со временем закрепилась в литературе[3]. Следует отметить, что коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать[5].
Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион, при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови[6].
Реактив Эллмана используют при определении активности глутатионпероксидазы; при этом для измерения активности изоферментов с широкой тиоловой специфичностью может быть использован не только глутатион, но также цистеин и гомоцистеин, благодаря равноэффективности реактива Эллмана для определения концентрации любого из тиолов.[7]
Примечания
Внешние ссылки
- Quantitation of sulfhydryls DTNB, Ellman’s reagent (с неправильным коэффициентом поглощения)