Бета-лактоглобулин

β-лактоглобулин (бета-лактоглобулин, BLG, Bos d 5) — основной сывороточный белок коровьего и овечьего молока (~3 г/л). Присутствует у многих других видов млекопитающих, за исключением человека. Структура, свойства и биологическая роль белка подробно изучены[1][2][3][4][5]. β-лактоглобулин является аллергеном молока[6][7].

Функция

Основным белком молочной сыворотки является β-лактоглобулин, за которым следует α-лактальбумин (β-лактоглобулин ≈ 65 %, α-лактальбумин ≈ 25 %, сывороточный альбумин ≈ 8 %, другие ≈ 2 %). β-лактоглобулин относится к семейству липокалинов и способен связывать многие гидрофобные молекулы. Это указывает на его возможную роль в их транспорте. Показано, что β-лактоглобулин способен связывать железо через сидерофоры, и таким образом может участвовать в борьбе с патогенами. При попадании в организм β-лактоглобулин способен переносить связанное железо в иммунные клетки человека. Это обеспечивает клетки микроэлементами и участвует в формировании иммунной толерантности. В грудном молоке человека гомолог β-лактоглобулина отсутствует[8].

Структура

Выявлено несколько вариантов белка. Основные варианты у коров обозначаются как A и B. Благодаря широкой распространённости и простоте очистки белок стал объектом множества биофизических исследований. Его структура неоднократно определялась методами рентгеноструктурного анализа и ЯМР[9]. β-лактоглобулин представляет прямой интерес для пищевой промышленности. Его свойства могут оказывать как положительное, так и отрицательное влияние на молочные продукты и их переработку[10].

Бычий β-лактоглобулин — относительно небольшой белок, состоящий из 162 остатков с молекулярной массой 18,4 кДа. В физиологических условиях он преимущественно находится в форме димера. При pH ниже 3 белок диссоциирует на мономеры, сохраняя своё нативное состояние, что подтверждено методом ЯМР[11]. В различных естественных условиях β-лактоглобулин также встречается в тетрамерной[12], октамерной[13] и других мультимерных[14] формах агрегации.

Растворы β-лактоглобулина образуют гели в различных условиях, когда нативная структура достаточно дестабилизирована для начала агрегации[15]. При длительном нагревании в условиях низкого pH и низкой ионной силы образуется прозрачный мелковолокнистый гель. В нём молекулы белка собираются в длинные жёсткие волокна.

β-лактоглобулин является основным компонентом молочной пенки. Он коагулирует и денатурирует при кипячении молока. После денатурации β-лактоглобулин образует тонкую студенистую плёнку на поверхности молока.

Промежуточные продукты фолдинга этого белка можно изучать с помощью оптической спектроскопии и денатурантов. Эти эксперименты выявили необычный, но важный промежуточный продукт, состоящий исключительно из альфа-спиралей, несмотря на то, что нативная структура представлена бета-листами. Вероятно, в процессе эволюции спиральный промежуточный продукт закрепился для предотвращения агрегации во время фолдинга[16].

Клиническое значение

Поскольку молоко является известным аллергеном[6], производители в Европейском союзе обязаны подтверждать наличие или отсутствие β-лактоглобулина. Это необходимо для соответствия маркировки требованиям Директивы ЕС. Лаборатории по контролю качества пищевых продуктов используют методы иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления и количественного определения β-лактоглобулина.

Хотя β-лактоглобулин считается основным аллергеном, защитный эффект от употребления сырого молока зависит от содержания белка в сывороточной фракции, и, следовательно, от β-лактоглобулина[17]. Этот контраст (аллергенность с одной стороны и защитные свойства с другой) связан с его способностью переносить микроэлементы. Когда β-лактоглобулин переносит микроэлементы, он действует толерогенно и защищает от развития аллергии. Однако при отсутствии такой нагрузки он становится аллергеном[18][19].

Лабораторная полимеризация β-лактоглобулина с помощью микробной трансглутаминазы снижает его аллергенность у детей и взрослых с IgE-опосредованной аллергией на коровье молоко[20].

Биотехнология

В 2018 году было объявлено о выращивании генетически модифицированных коров[7]. У этих коров гены, отвечающие за выработку β-лактоглобулина, были удалены с помощью зигота-опосредованной делеции. Цель проекта — получение молока без этого аллергена[7].

В сентябре 2023 года Европейский инновационный совет профинансировал проект Hydrocow компании Solar Foods. Проект направлен на производство β-лактоглобулина с использованием водородокисляющих бактерий рода Xanthobacter, углекислого газа и электричества.

Примечания

  1. Interactions of β-Lactoglobulin With Small Molecules // Encyclopedia of Food Chemistry. — Elsevier, 2019. — Vol. 2. — P. 560–565. — ISBN 978-0-12-814045-1. — doi:10.1016/B978-0-08-100596-5.21488-1.
  2. Beta-lactoglobulin // Advanced Dairy Chemistry: 1. Proteins. — Elsevier Applied Science, 1992. — P. 141–190. — ISBN 978-1-4419-8602-3. — doi:10.1007/978-1-4419-8602-3_7.
  3. Sawyer L, Kontopidis G (October 2000). “The core lipocalin, bovine beta-lactoglobulin”. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure and Molecular Enzymology. 1482 (1—2): 136—48. DOI:10.1016/s0167-4838(00)00160-6. PMID 11058756.
  4. Kontopidis, George; Holt, Carl; Sawyer, Lindsay (2002). “The Ligand-binding Site of Bovine β-Lactoglobulin: Evidence for a Function?”. Journal of Molecular Biology. Elsevier BV. 318 (4): 1043—1055. DOI:10.1016/s0022-2836(02)00017-7. ISSN 0022-2836.
  5. Kontopidis G, Holt C, Sawyer L (April 2004). “Invited review: beta-lactoglobulin: binding properties, structure, and function”. Journal of Dairy Science. 87 (4): 785—96. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(04)73222-1. PMID 15259212.
  6. 1 2 listed in Annex IIIa of Directive 2000/13/EC
  7. 1 2 3 Wei, Jingwei; Wagner, Stefan; Maclean, Paul; Brophy, Brigid; Cole, Sally; Smolenski, Grant; Carlson, Dan F.; Fahrenkrug, Scott C.; Wells, David N.; Laible, Götz (2018-05-16). “Cattle with a precise, zygote-mediated deletion safely eliminate the major milk allergen beta-lactoglobulin”. Scientific Reports. 8 (1): 7661. Bibcode:2018NatSR...8.7661W. DOI:10.1038/s41598-018-25654-8. ISSN 2045-2322. PMC 5955954. PMID 29769555.
  8. Fiocchi A, Brozek J, Schünemann H, Bahna SL, von Berg A, Beyer K, et al. (April 2010). “World Allergy Organization (WAO) Diagnosis and Rationale for Action against Cow's Milk Allergy (DRACMA) Guidelines”. The World Allergy Organization Journal. 3 (4): 57—161. DOI:10.1097/WOX.0b013e3181defeb9. PMC 3488907. PMID 23268426.
  9. PDB 3BLG; Qin BY, Bewley MC, Creamer LK, Baker HM, Baker EN, Jameson GB (October 1998). “Structural basis of the Tanford transition of bovine beta-lactoglobulin”. Biochemistry. 37 (40): 14014—23. DOI:10.1021/bi981016t. PMID 9760236.
  10. Jost R (1993). “Functional characteristics of dairy proteins”. Trends in Food Science & Technology. 4 (9): 283—288. DOI:10.1016/0924-2244(93)90071-H.
  11. Uhrínová S, Smith MH, Jameson GB, Uhrín D, Sawyer L, Barlow PN (April 2000). “Structural changes accompanying pH-induced dissociation of the beta-lactoglobulin dimer”. Biochemistry. 39 (13): 3565—74. DOI:10.1021/bi992629o. PMID 10736155.
  12. Timasheff SN, Townend R (1964). “Structure of the β-Lactoglobulin Tetramer”. Nature. 203 (4944): 517—519. Bibcode:1964Natur.203..517T. DOI:10.1038/203517a0. S2CID 4190604.
  13. Gottschalk M, Nilsson H, Roos H, Halle B (November 2003). “Protein self-association in solution: the bovine beta -lactoglobulin dimer and octamer”. Protein Science. 12 (11): 2404—11. DOI:10.1110/ps.0305903. PMC 2366967. PMID 14573854.
  14. Rizzuti B, Zappone B, De Santo MP, Guzzi R (January 2010). “Native beta-lactoglobulin self-assembles into a hexagonal columnar phase on a solid surface”. Langmuir. 26 (2): 1090—5. DOI:10.1021/la902464f. PMID 19877696.
  15. Bromley EH, Krebs MR, Donald AM (2005). “Aggregation across the length-scales in beta-lactoglobulin”. Faraday Discussions. 128: 13—27. DOI:10.1039/b403014a. PMID 15658764.
  16. Kuwajima K, Yamaya H, Sugai S (December 1996). “The burst-phase intermediate in the refolding of beta-lactoglobulin studied by stopped-flow circular dichroism and absorption spectroscopy”. Journal of Molecular Biology. 264 (4): 806—22. DOI:10.1006/jmbi.1996.0678. PMID 8980687.
  17. Loss G, Apprich S, Waser M, Kneifel W, Genuneit J, Büchele G, et al. (October 2011). “The protective effect of farm milk consumption on childhood asthma and atopy: the GABRIELA study”. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 128 (4): 766—773.e4. DOI:10.1016/j.jaci.2011.07.048. HDL:1874/407013. PMID 21875744.
  18. Roth-Walter F, Afify SM, Pacios LF, Blokhuis BR, Redegeld F, Regner A, et al. (January 2021). “Cow's milk protein β-lactoglobulin confers resilience against allergy by targeting complexed iron into immune cells”. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 147 (1): 321—334.e4. DOI:10.1016/j.jaci.2020.05.023. HDL:10261/272213. PMID 32485264.
  19. Hufnagl K, Ghosh D, Wagner S, Fiocchi A, Dahdah L, Bianchini R, et al. (January 2018). “Retinoic acid prevents immunogenicity of milk lipocalin Bos d 5 through binding to its immunodominant T-cell epitope”. Scientific Reports. 8 (1): 1598. Bibcode:2018NatSR...8.1598H. DOI:10.1038/s41598-018-19883-0. PMC 5785490. PMID 29371615.
  20. Olivier CE, Lima RP, Pinto DG, Santos RA, Silva GK, Lorena SL, et al. (October 2012). “In search of a tolerance-induction strategy for cow's milk allergies: significant reduction of beta-lactoglobulin allergenicity via transglutaminase/cysteine polymerization”. Clinics. 67 (10): 1171—9. DOI:10.6061/clinics/2012(10)09. PMC 3460020. PMID 23070344.

Дополнительно по теме

Категории